基因检测实验室如何建立良好操作规范?

基因检测实验室如何建立良好操作规范?

SICOLAB认为,为了最大程度地减少污染应建立良好操作规范,确保遵守良好操作规范是至关重要的。

1)实验人员在上岗前.应经过严格的培训和考核,确保操作正确、熟练。应熟练掌握各项操作步骤.尽量在短时长内完成各项操作。在打开

Eppendorf管之前应经低速、短时离心(2000~3000g,约10s),应使用正确的方法打开,不能用力崩开.以减少和避免气溶胶的产生。

2)各区域要有明显标识,并使用单向流动降低潜在污染。用颜色标签对每个实验室的设备、试剂、工作服和供应品有助于保持单向流动。实验室手册和笔记本也不能在每个房间之间进行传递。实验室可以用电子数据报告以避免这种潜在污染的来源。

3)在一天的工作中.实验员在扩增和产品检测室工作之后不能再返回试剂或样品提取区。类似地,实验员在样品提取区工作后不能返回试剂准备区 如果一个实验员不能不返回工作流向中上游的房间,实验员应该先淋浴和更换衣服。若在一些极端情况下.一些耗材和试剂不能不返回工作流向中上游的房间.必须事先使用漂白剂和酒精对其进行彻底清洁。返还的物品架在浸泡于蒸馏水中转移到洁净区之前,应浸泡在1% 漂白剂溶液中过夜,如果破坏了工作流向,受影响的实验室房间和设备需要进行检测结果的监测。

4)每间实验室都应该配备专用实验室外套和无粉手套。实验者在任何时候都要穿工作服和佩戴手套。手套要经常更换,在DNA提取过程中每一步之间都要更换。离开实验室之前要脱掉实验服,扔掉手套。更换实验服和手套降低了模板(PCR进行需要的核酸)或扩增核酸的污染可能性。在处理了阳性对照样品或含目标序列的样品后、处理了模板或扩增核酸后,与外界皮肤接触后,要更换手套。后者防止引入在皮肤上存在的酶,如降解核酸的DNA酶和RNA酶。

基因检测实验室如何建立良好操作规范?

5)定期清洗防护服可降低对工作区和PCR反应的污染风险。实验服要和普通衣服隔离开(如实验服不能带回家,不能和其它衣服一起洗)。清洗时。一个工作区域的工作服放在一起洗(如样品核酸提取区的防护服不能和扩增及产品检测室的防护服一起洗)。负责清洗防护服的公司要确保分批清洗防护服,防止一个实验区域的防护服和另一个区域的防护服混杂在一起清洗。清洗的时长取决于实验室PCR工作的工作量,工作量大的实验室可能每周或每天清洗防护服。制作阳性对照时穿着的防护服要指定只用于这项工作时穿着,而且清洗得要更勤。为了减少清洗,也可以使用一次性防护服。

6)每次实验后.所有表面都要用0.6% 的次氯酸钠进行清理。次氯酸钠应该当天配制,将商业漂白剂与水进行1:10的稀释,将pH调到7。这个溶液可以抑制致病原,破坏核酸。残留的漂白剂要用0.1%的硫代硫酸钠和70% 乙醇或等价物去除,否则可能会在不锈钢或罩子上留下斑迹。商业产品是为去除核酸特别设计的,核酸酶也可以用于表面的清理。只要怀疑受到污染,热循环机和离心机用稀释的漂白剂清理(同3)。离心管的清洗根据制造商的说明。货架和托盘每次使用后在0.6% 的次氯酸钠溶液中浸泡后用水充分冲洗。凝胶梳和玻璃器皿使用后用中性洗涤剂或用水冲洗。UNG酶进行预反应,可以去除残留在DNA中的dU(但不影响DNA、gUTP或RNA),产生数十或数百的无碱基位点,DNA聚合酶会在这些位点处停滞。而且这些位点是不稳定的,在热循环中会发生断裂,每一种损伤都会防止重扩增的发生。PCR产物越长,UNG去污染的效率就越高,但对短于100bp的PCR产物不能用UNG完全消除污染。

4)紫外线控制污染。用紫外线使干燥的DNA失活以减少器材表面模板DNA污染的手段,机理是通过在相邻的嘧啶碱基之间形成环丁烷而造成DNA损伤,环丁烷形成链内的嘧啶二聚体,从而抑制了聚合酶介导的链延伸反应。其缺陷是不能消除所有污染,而只能将污染降低几个数量级,并且当DNA片段小于300bp时效果较差。另外像加样器、离心机等器材只有一小部分是向着光源的,这样就不能被紫外线有效地去除污染。因而,紫外线照射仅可以为PCR实验室的无污染提供部分安全保障。

5)应该在日常样品检测中分析阳性和阴性质量控制对照结果.以说明基于PCR方法的实验结果的可靠性。

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